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植物基因组原位杂交技术服务 武汉科锐诺生物
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发布时间: 2023-04-18 11:37
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基因芯片又称DNA芯片或DNA微阵列。其原理是在固体载体(硅片、玻片、硝1酸纤维素膜)上按照特定的排列方式集成大量已知DNA/cDNA片段,形成DNA/cDNA微矩阵。   基因芯片技术是一门新兴的技术,由于该技术能在一次实验中自动、快速、敏感地同时检测数千条序列,而且获得的序列信息高度特异、稳定。根据探针类型分为DNA芯片和cDNA芯片,前者用于检测基因突变,实现肿1瘤早期诊断、判断预后及治1疗;后者用于检测基因表达,对肿1瘤进行发现性分类和预测性分类。





荧光定量PCR(realtimePCR)技术是近几年基于普通PCR技术发展的一种新技术。它借助荧光信号来检测PCR产物,通过荧光染料或荧光标记的特异探针,植物基因组原位杂交技术服务,对PCR产物进行标记跟踪,在扩增过程中,每经过一次循环,荧光定量PCR仪就会收集一次荧光信号,实时检测整个PCR进程。用荧光定量PCR法检测目的基因仅需检测样本是否具有扩增信号即可,且PCR反应具有核酸扩增的高1效性,可检测出微小突变。根据探针标记不同可分为TaqMan探针法和ARMS法。


杂交结束后,去除杂交液,立即于室温把滤膜放入大体积(300-500ml)的2×SSC和0.1% SDS溶液中,轻轻振摇5分钟,并将滤膜至少翻转一次。重复洗 一次,同时应避免膜干涸。

68℃用300-500ml 1×SSC和0.1% SDS溶液洗膜两次,每次1-1.5小时。此时已可进行自显影。如背景很高或实验要求严格的洗膜条件,可用300-500ml 0.2×SSC和0.1% SDS的溶液于68℃将滤膜浸泡60分钟。

把滤膜放在纸巾上于室温晾干后,把滤膜(编号面朝上)放在一张保鲜膜上,并在保鲜膜上作几个不对称的标记,以使滤膜与性自显影片位置对应。

用第二张保鲜膜盖住滤膜。加X片并加上增感屏于-70℃曝光12-16小时。

底片显影后,在底片上贴一张透明硬纸片。在纸上标记阳性杂交信号的位置,同时在不对称分布点的位置上作出标记。可从底片上取下透明纸,通过对比纸上的点与琼脂上的点来鉴定阳性菌落。


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